1 单细胞产品类型

• 单细胞业务部产品：单细胞3’转录组、单细胞5’转录组、单细胞VDJ、单细胞ATAC、单细胞多组学、单细胞Flex、单细胞三代全长转录组、单细胞Crispr； 单细胞3’/5’转录组：可寄送血液、新鲜/冻存组织、细胞系、活体植株等，进行单细胞/核悬液制备，不限物种类型（带polyA尾，参考基因组注释完整），但非常规物种请提前联系销售确认可行性； 单细胞5’转录组+单细胞VDJ/单细胞VDJ：可寄送血液、新鲜组织、细胞系等，进行单细胞悬液制备，仅限人、小鼠物种； 单细胞ATAC/单细胞多组学：可寄送血液、新鲜/冻存组织、细胞系、活体植株等，进行单细胞核悬液制备，不限物种类型（参考基因组质量良好，非人/鼠/哺乳动物均属于风险样本），非常规物种请提前联系销售确认可行性； 单细胞Flex：可寄送血液、新鲜/冻存组织、FFPE样本等，进行单细胞/核悬液制备，仅限人物种； 单细胞三代全长转录组：可寄送血液、新鲜组织、细胞系、活体植株等，进行单细胞悬液制备，不限物种类型（带polyA尾，参考基因组注释完整），但非常规物种请提前联系销售确认可行性； 单细胞Crispr：建议提供基因编辑后的单细胞悬液，不限物种类型（带polyA尾，参考基因组注释完整），但非常规物种请提前联系销售确认可行性；

2 样本寄送流程及注意事项

• 声明： 实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）的所有样品。对于高毒性动植物等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与云顶国际技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。 提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染。

• 2.1 新鲜组织及血液样本寄送

  2.1.1 寄送流程

  用组织保存液保存新鲜组织进行寄送，基本流程如下： 注：合同签订后，申请组织保存液至客户单位，寄送样本至公司（血液/骨髓无需申请保存液） 邮寄样本前需发邮件给shaohaiyan@novogene.com，抄送scrna-sp@novogene.com，样本制备预警邮件发送模板指南如下：有流式细胞分选需求，需在备注中注明分选要求，且流式分选需附样本评估附件。

• 2.1.2 组织保存液寄送样本

  客户收到组织保存液后（见STEP2图），组织保存液应在4℃条件下保存（效期3个月，有沉淀/冻融后不可使用），切勿冻存； 寄样时，先将样本放入装有组织保存液的储存管中，组织尽量无菌放入液体中，组织保存液应当浸没组织，然后迅速盖紧加封口膜包装好。 组织保存液寄送样本小Tips： Step1、首先准备一个泡沫箱和适量冰袋，注意请勿使用-80℃冰箱冰袋用于邮寄样本 Step2、标明样本名称，用适量的塑料泡沫对装有组织的保存液管进行包裹 Step3、确保管子包裹完好 Step4、用保鲜膜或者胶带封好 Step5、置于冰袋上，保证不和冰袋直接接触 Step6、找一些填充物进行填充，确保样本在其中不会过多震荡 注意：寒冷天气下，可借助保温桶等设备防止组织结冰 图1 组织保存液寄送样本小Tips 大于0.2g实体瘤组织（如需进行流式分选，根据分选的要求样本量通常要大于0.6g，具体个性化分选需求的组织用量可同销售沟通，送样时需客户提供除CD45/去除死细胞之外的流式相应抗体），保护液能完全浸没组织为宜，一般样本1mL可保证浸没； 图2 组织保存液浸润样本示例 血液（全血）/骨髓样本置于EDTA抗凝管中，人4mL，鼠1-2mL；目前除了人和小鼠的血液样本可以制备PBMC/BMMC之外，其余物种均需要联系云顶国际进行评估。 如样本量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复，以防万一； 客户需标明：样本名称，组织类型，离体时间，浸入组织保存液时间； 寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触，需用泡沫包裹，保证4℃左右的低温环境； 冰袋寄送（注意不要选择干冰），务必保证在48小时内到达北京、天津、广州、上海、成都、杭州的单细胞样本接收室。

  常规组织	肿瘤、器官组织等	绿豆		达到0.08g可以尝试有风险，细胞量可能偏少。
  		黄豆		正常，可以尝试，细胞量通常可以达到上机要求。
  		花生		正常，可以尝试，细胞量通常十分充足。
  骨组织样本	软骨类	花生		软骨组织需要1g（一颗中等花生米大小）以上的组织量，达到送样量通常消化后细胞量充足。
  	硬骨类	成人中指指甲大小（2-3块		硬骨组织需要10g以上的送样量，可事先用骨钳将组织处理成1cm*1cm左右的小块（10g大约2.5-3块左右），达到送样量通常消化后细胞量充足。
  血管类	人主动脉、肺动脉及静脉	花生壳		要求送样量达到1g为宜，组织量大约为一个花生壳大小(1cm*2.5cm)。
  	小鼠血管	2根		数量若干根，总量达到6cm为宜
  其他类型	穿刺样本	直径1mm穿刺条（大致曲别针粗细）		长度>2cm，可以尝试，细胞量无法保证；2cm>长度>0.5cm，有一定风险，可以尝试，细胞量有可能无法达到上机要求；长度<0.5cm∶高风险，不建议送样。
  	小鼠十二指肠绒毛	建议2cm长度		一只成年小鼠全部十二指肠绒毛 组织要求：切除十二指肠，将肠内容物轻轻冲洗干净，待到制备前打开肠道，刮下绒毛。 运送时间：最好在6h内制备并上机。不建议寄送。
  	鼠类胰腺	如图组织量可以制备千万级细胞		一只成年小鼠，细胞量足够 组织要求：干净的胰腺，剔除肠系网膜。 运送时间：最好24h之内。 运输条件：申请特殊组织保护液（胰腺/胰腺癌）

  备注：由于穿刺类样本的特殊性，建议使用一般14或16G穿刺针，且均按照风险样本对待；胰腺（建议现取现制备，推荐悬液）、脂肪（推荐1.5~2mL，最低≥1mL；新鲜样本需用组织保存液浸润，24h运输到云顶国际）

• 2.2 新鲜细胞悬液仅适用于同城寄送

  （1）客户自选缓冲液需注意选用无钙、镁、EDTA等影响酶活性物质，官方推荐含0.04% BSA的PBS; （2）细胞量尽量保证在1×106cells以上; （3）如需流式分选，分选后目的细胞尽量保证在1×105cells以上（寄送前提前联系）； （4）冰袋寄送（注意不要选择干冰），寄送时装有样本的储存管不能和冰袋直接接触，需用泡沫包裹，保证4℃左右的低温环境； （5）寄送时间小于4小时；

• 2.3 冻存细胞干冰寄送

  2.3.1 客户冻存细胞寄送方法

  1）分离的细胞梯度冻存（程序降温仪或者异丙醇-80℃过夜后液氮保存）；建议冻存密度3-6×106cells /mL(管)，每管1mL；如细胞量足够建议首次寄送时同一样本2-3管重复，以防万一； 2）将液氮保存的细胞，干冰寄送，干冰量需充足； 3）寄送前发送邮件给邵海燕，抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”；主题：XX项目细胞复苏制备预约，邮件中写明合同信息、客户单位、样本名称、样本个数、细胞类型、实验类型，确保送到时可以直接进行复苏及单细胞捕获建库； 4）细胞复苏后活率大于80%将直接进行上机，活率小于80%的细胞云顶国际不建议上机；如样本珍贵，和客户沟通后，由客户决定是否上机。 注：细胞冻存请使用专用的细胞冻存管；建议首次寄送预实验时同一处理（每一个重复）送 2-3 份样本，以做备选；

• 2.3.2 细胞冻存方法

  （如客户细胞尚未冻存，可参考如下冻存方法） 1）将制备好的单细胞悬液离心（300-500g，5分钟，4℃），去上清，细胞缓冲液重悬后计数（浓度700-1200 cells/μL），调整细胞总量5-10×106cells（冻存细胞风险较大，如需流式需提前跟客户说明风险）； 2）备注：客户实验室需备台式冷冻离心机（水平转子15mL离心管适配器）；注意试剂和仪器无菌，操作过程要求无菌操作； 3）对于活性大于80%的细胞进行离心（300-500g，5分钟，4℃），去上清，加入冻存液，重悬细胞，然后将1mL细胞悬液加入到细胞冻存管中，拧紧盖子； 4）将细胞冻存管放到程序降温盒中（推荐异丙醇冻存盒）；将程序降温盒放入到-80℃，24小时后选择干冰寄送或者液氮保存； 5）干冰寄送：将细胞冻存管放到干冰中，冻存管做好标记（样本名称、冻存时间、客户单位、姓名），选择干冰15-20公斤（夏季可以适度增加）。

• 2.4 冻存组织寄送（液氮速冻组织寄送抽核处理）

  冻存组织基本流程如下： （1）寄送前发送邮件预约实验； 寄送前销售发送邮件给shaohaiyan@novogene.com，抄送单细胞样本制备群邮箱“scrna-sp@novogene.com”；邮件发送模板参考单细胞组织样本到样预警模板 （2）组织样本要求： 一般组织建议0.2g-0.5g/管（如需进行流式分选，0.6-1g/管，不同组织有差异），组织直接进行液氮速冻（避免PBS清洗、不可放入保存液后冻存），如样本量足够建议首次寄送同一样本2-3管重复，以作备用 若穿刺样本量少，则不质控直接抽核，需要提前告知客户风险性 （3）干冰寄送至天津实验室，收样人为样本组，销售需要进行样本录入，确保干冰量充足 （4）10x官网建议：在整个实验过程中RNA酶抑制剂浓度是1U/μL 风险提示：抽核后质控为显微镜观察，非定量判断，有一定误差；另外非哺乳动物细胞文献及标准比较少，对于单核测序来说，存在风险；请客户知悉。

• 2.5 植物样本寄送

  （1）植物样本要求 植物类样本支持原生质体制备与植物抽核制备，均需寄送活株。 寄送过程中可以使用木架固定培养瓶及幼苗，以保证运输途中植物完整性及状态的稳定性。 制备的目标组织量建议>2g，幼嫩组织优先，木质含量高的组织类型成功率不稳定，需客户知悉。 （2）关于特殊样本类型 含淀粉样本（如甘薯、人参、三七、马铃薯等）无法进行原生质体制备，只能抽核处理； 对于抽核类样本，如样本涉及真菌侵染、细菌处理、病毒、虫害等处理，需要确认样本详细情况，是否存在寄生/残留，如有残留/寄生，则无法通过流式进行核悬液的纯化实验。

• 2.6 动物样本寄送

  （1）常规样本 对于常规动物组织样本、血液等，上机要求和单细胞转录组捕获上机质检标准一致，寄送要求同2.1-2.4送样建议； 其中血液（全血）/骨髓样本，如需制备PBMC/BMMC，除人和小鼠之外，其余物种均需要联系云顶国际进行评估。 制备的目标组织量建议>2g，幼嫩组织优先，木质含量高的组织类型成功率不稳定，需客户知悉。 （2）非常规样本 对于非常规样本，诸如鱼类、贝类等，建议进行活体寄送，放置在养殖液体中，充氧寄送至天津实验室。（解剖需老师协助）

• 2.7 类器官组织寄送

  送样建议：类器官细胞得率低，建议尽可能多提供，或进行预实验测试细胞得率
  • 悬液类样本量：大于2x106 cells
  • 离心后的沉淀样本量：黄豆大小，建议大于0.2g
  • 新鲜样本寄送过程中建议使用类器官的完全培养基，冰袋寄送或同城闪送（推荐），48h寄送到云顶国际单细胞实验室
  • 冻存组织建议尽量去除类器官培养基，液氮速冻
  • 需提前确认类器官是否含有支架，如含支架，需提供支架材料的溶解方案或试剂

• 2.8 FFPE样本寄送

  （1）石蜡块：优先建议提供石蜡块（带卡槽），要求被包埋组织横截面积>0.5cm2，蜡块密封后冰袋寄送 （2）石蜡卷：要求石蜡卷现切现用，先送质检样本，质检合格后再送正式样本 质检样本要求：5?m厚度5-6卷，现切现用（7天之内），置于EP管内，密封后冰袋寄送； 正式样本要求：25um厚度4-6卷，现切现用（7天之内），每两张石蜡卷，置于一个1.5ml EP管内，密封后冰袋寄送，切片厚度不可减小，需保证石蜡卷完整性； FFPE样本寄送至天津单细胞实验室，质检样本/正式样本均需要制备预警邮件，并附件FFPE样本基本信息，如FFPE样本寄送至样本组，务必备注样本放于4℃，切勿放在-80℃

• 2.9 体液类/冲洗液类样本寄送

  （1）送样建议：无菌取样，提取体液后，直接放入15ml或者50ml离心管中，并做好标记。由于此类样本细胞得率低，建议尽可能多提供。 （2）样本寄送：置于4℃环境进?保存运输。

3 样本寄送信息

• 3.1 天津

  新鲜样本/FFPE样本/捕获完成的cDNA：单细胞样本接收员：18522138772 冻存组织：云顶国际样品组：18526699037 邮寄地址：天津市武清开发区创业总部基地B07

• 3.2 北京

  1）建议销售经理直送到公司，其次选择闪送，送样前与北京样本接收员联系： 2）样本接收员：15692242863 地址：北京市朝阳区酒仙桥北路甲10号院301号楼101

• 3.3 广州

  1）建议销售经理直送到实验室 2）样本接收员：13212047356 地址：广东省广州市黄浦区开源大道11号C6栋西门702

• 3.4 上海

  1）建议销售经理直送到实验室 2）样本接收员：17602619385 地址：上海市闵行区绿洲环路790号生命健康科学城9号3幢

• 3.5 成都

  1）建议销售经理直送到实验室 2）样本接收员：18522589457 地址：四川省成都市武侯区国学巷37号华西医院医学转化楼8楼

• 3.6 杭州

  1）建议销售经理直送到实验室 2）样本接收员：13001325524 地址：浙江省杭州市余杭区留泽街3号楼三楼

4 注意事项

• （1）保存液中寄送新鲜组织务必保证48小时内到达天津、北京、广州、上海、成都、杭州实验室（墨卓单细胞转录组支持天津、广州、上海实验室），干冰寄送冻存组织/FFPE类只能寄送至天津实验室，项目启动前务必提前和邵海燕预约，确保到达时间以及实验室可安排人员操作； （2）以上方案供客户选择，推荐保存液中寄送新鲜组织消化，或冻存组织抽核。10x技术因为构建细胞图谱而发展，本身更适用于新鲜样本制备单细胞悬液，任何操作都可能对细胞类型与基因表达造成一定影响。因此，采用寄送样本的客户课题方向不推荐细胞全图谱构建类型。不论选择哪种方案，均建议首次送样同一处理送2-3份样本，以做备选； （3）干冰寄送过程中确保到实验室时干冰仍有剩余，推荐尽量48小时内到达。 （4）单细胞悬液质量很大程度取决于组织状态，离体、病变、脆弱细胞类型、酶的分泌等均可能影响细胞活性。因此不能承诺所有样本制备均成功上机。 （5）流式分选：送样前需提前预约，且需提前和实验室沟通评估。所需样本量有所增加，一般组织样本最少0.6g，PBMCs 5-15mL，其他要求一致。目前可承接人类组织的CD45分选，CD45抗体由云顶国际提供。其他分选类型不提供抗体，且需提前和实验室沟通评估，一次最多分选4种细胞类型。抗体推荐Biolegend或BD公司（提醒客户注意抗体识别细胞膜蛋白还是核膜蛋白，对于做单细胞和单核的抗体可能有差异，以及注意区分抗体适用物种）。